UA-82266412-1

Prosedur Penggunaan Plant Preservative Mixtur (PPM) untuk Media Kultur Jaringan

Plant Preservative Mixtur (PPM) untuk kultur jaringanPlant Preservative Mixtur (PPM) merupakan preservative/biosida spectrum luas yang efektif untuk mencegah atau menurunkan kontaminasi mikroba pada kultur jaringan tanaman. Pada dosis optimum PPM sangat efektif dan tidak mempengaruhi vitro germination, ploriferasi kalus dan regenerasi kalus. Plant Preservative Mixtur (PPM) ini mengandung zat aktif yang terdiri dari :
5-Chloro-2 methyl-3-(CH) – isothiazolone 0,1350%
2-methyl-3(H)-isothiazolone 0,0412%

hasil kultur jaringanProsedur yang dijelaskan di bawah ini merupakan prosedur secara umum. Sedikit modifikasi mungkin diperlukan untuk spesies tanaman tertentu sebelum pemakaian untuk media kultur jaringan. PPM secara signifikan dapat menyederhanakan pekerjaan kultur jaringan dengan prosedur kerja sebagai berikut:
1. Media kultur jaringan yang mengandung PPM dapat dituangkan diluar laminar yang terpapar aliran udara. Pelat yang mengandung media harus segera ditutup setelah terjadi pembekuan agar. Pengeluaran media yang dilakukan dengan pompa, disarankan untuk melewatkan air panas seperti pada autoclave melalui selang sebelum dan setelah penuangan media.
2. Media cair sensitif panas atau stabil panas yang mengandung PPM tidak memerlukan sterilisasi dengan filter milipore atau autoclave. Hal tersebut dilakukan jika media akan disimpan dalam wadah steril dan larutan stok tidak terkontaminasi. Dalam media diperkaya yang mengandung 200 mg/L atau lebih asam amino atau protein, dianjurkan menyaring media dengan PPM.
3. Jika bekerja dalam laminar, peralatan (pisau bedah/forceps) tidak memelukan nyala api. Peralatan tersebut harus secara periodik dicelupkan dalam alkohol 70%. Laminar tidak memerlukan sertifikasi dan pengerjaan dapat dilakukan juga diluar laminar pada permukaan yang bersih untuk jangka waktu tidak lebih dari 1 jam.
4. PPM adalah cairan larutan asam (pH 3.8). PPM harus disimpan pada suhu 4oC. Pada dosis yang dianjurkan yaitu 0.05-0.2% (v/v), PPMdapat ditambahkan ke media sebelum dan sesudah proses autoclave untuk mencegah kontaminasi udara dan endogen pada kepadatan inokulum yang rendah.
5. PPM kurang efektif jika diterapkan pada bakteri atau spora jamur dengan kepadatan tinggi yang ditemukan secara teratur pada kulit biji. Untuk perkecambahan secara in vitro, secara konvensional permukaan benih harus disterilkan dengan pemutih yang terdaftar oleh EPA. Oleh karena itu, dengan adanya PPM (dalam perkecambahan), benih dapat dibilas dibawah air keran dalam saringan non steril dan dibiarkan kering sebaiknya dalam laminar. Jika ujung alat telah menyentuh bakteri aktif, kultur jamur, atau yang diduga kontaminan, maka alat tersebut harus disterilkan dengan autoclave atau menggunakan elemen pemanas listrik.
6. Tingkat Dosis Secara Umum
Dengan pengecualian dari kontaminan endogen, tentang dosis yang dianjurkan adalah 0.05-0.2% (untuk poliferasi kalus, organogenesis, dan embriogenesis, kisaran dosis yang dianjurkan adalah 0.05-0.075%). Tambahkan PPM pada media sebelum atau setelah proses autoclave untuk mencegah kontaminasi udara dan endogen pada kepadatan inokulum rendah atau bakteri dengan pertumbuhan yang lambat. Untuk menghilangkan kontaminasi endogen dengan kepadatan yang lebih tinggi, dibutuhkan dosis PPM yang lebih tinggi.
7. Kontaminasi Endogen
(A) Untuk eksplan: secara lembut dan rutin, kocok/aduk eksplan dengan panjang 1 cm. eksplan yang panjang/lebih pendek dikocok selama 4-12 jam dalam larutan 4-5% PPM yang dilengkapi dengan media MS garam basal pekat tanpa pengukuran pH dan penambahan tween 20. Tanpa dilakukan pembilasan, masukkan ke dalam media yang telah dilengkapi 0.05-0.1% PPM untuk tanaman herbal dan 0.2% PPM untuk tanaman berkayu.
(B) Untuk umbi-umbian, kocok/ aduk sampel umbi dalam pemutih, bilas dengan air (bisa dilakukan pada kondisis nonsteril). Iris umbi menjadi bentuk irisan yang tipis kemudian dikocok selama 12-24 jam dalam larutan 4-5% PPM yang dilengkapi dengan media MS garam basal pekat tanpa pengukuran pH dan penambahan tween 20. Tanpa pembilasan, masukkan irisan umbi tadi ke dalam media yang mengandung 0.1-0.2% PPM .
8. Jika dengan prosedur yang dijelaskan tadi, hasilnya tidak memuaskan (terutama untuk ekspalan yang tebal, tingkat kepadatan eksplan yang tinggi, dan benih), rekomendasi prosedur dibawah ini dapat dilakukan:
(A) Kocok/aduk eksplan dalam air( 1 jam untuk jaringan tanaman lunak dan 2 jam untuk jaringan tanaman keras)
(B) Kocok/aduk eksplan dalam 50% PPM yang dilengkapi dengan media MS garam basal pekat tanpa pengukuran pH dan penambahan tween 20 selama 5-10 menit.
(C) Tanpa pembilasan, masukkan eksplan ke dalam media. Dalam hal kontaminasi jamur, penambahan PPM ke dalam media adalah suatu pilihan. Namun untuk kontaminasi bakteri atau campuran, penambahan 0.05-0.2% PPM ke dalam media di bulan pertama sangat penting. Jangan membuang tanaman yang teroksidasi dalam tingkat yang tinggi karena 50% bagian eksplan akan pulih dalam 4-6 minggu.
9. Untuk Dekontaminasi Kontaminan Tanaman dalam Kultur ( Pemeliharaan dan Pengobatan)
catatan: kultur harus tidak terlihat terkontaminasi lebih dari 1 minggu
(A) Bersihkan bahan mekanis menggunakan sikat gigi yang lembut dibawah aliran keran, lalu kocok/aduk dalam larutan PPM ( diencerkan dalam air steril) selama 5-15 menit. Untuk kontaminasi bakteri/campuran, disarankan untuk menurunkan pH larutan pada kisaran 2.8-3.2 dengan mencampurkan 1:1 PPM pekat (100%) dengan 0.6 gram/liter larutan asam sitrat ( menggunakan air steril).
(B) Tanpa pembilasan, masukkan ke dalam media dengan 0.05-0.2% PPM setidaknya selama 1 bulan. Jauhkan kultur dari cahaya intensitas tinggi untuk 10 hari pertama. Seperti yang telah dijelaskan, jangan membuang eksplan yang teroksidasi. Tunggu 4-6 minggu, sekitar 50% bagian eksplan akan pulih. Dalam beberapa kasus, spora jamur atau bakteri yang terletak jauh dalam eksplan adalah diluar jangkauan PPM. Dalam kasus tersebut dan setelah perendaman dalam air dengan periode tertentu dapat diantisipasi dengan cara: iris eksplan memanjang dan kemudian dikocok /aduk dalam larutan PPM 50% selama 15 menit.
10. Untuk menghilangkan agrobakterium
Setelah co-cultivasi, bilas permukaan daun dengan air. Celupkan seluruh permukaan daun terinfeksi dalam larutan 100% PPM (dilengkapi dengan garam basal pekat) selama kurang lebih 2 menit. Lap permukaan daun diantara 2 handuk bahan kertas steril dan tempatkan dalam media yang dilengkapai antibiotik dosis tinggi yang biasa digunakan. Setelah 3 minggu, pindahkan ke dalam media dengan konsentrasi PPM 0.05-0.075%.

{ Leave a Reply ? }

  1. Darrin Dokken

    Simply wanna remark that you have a very decent site, I love the style it really stands out.

  2. adidas nmd

    Exactly what I was searching for, thanks for putting up.

  3. hop over to this site

    Yeah bookmaking this wasn’t a speculative conclusion outstanding post! .

  4. get the facts

    This is the right blog for anyone who wants to find out about this topic. You realize so much its almost hard to argue with you (not that I actually would want…HaHa). You definitely put a new spin on a topic thats been written about for years. Great stuff, just great!

  5. Josef Kinnett

    My brother suggestedrecommended I might like this blogwebsiteweb site. He was totallyentirely right. This post actuallytruly made my day. You cann’tcan not imagine justsimply how much time I had spent for this informationinfo! Thanks!

  6. Terisa Viviano

    I don’t even know the way I ended up here, however I believed this post used to be good. I don’t understand who you are but certainly you are going to a well-known blogger if you happen to aren’t already 😉 Cheers!

  7. Attorney Legal Services

    Nice blog here! Also your site loads up very fast! What host are you using? Can I get your affiliate link to your host? I wish my website loaded up as fast as yours lol

  8. National Sports

    I precisely wanted to thank you so much once again. I’m not certain what I would’ve accomplished in the absence of those strategies contributed by you concerning such a question. It previously was a very difficult concern for me personally, however , considering a new professional avenue you resolved it forced me to jump for fulfillment. I’m thankful for your guidance and thus pray you really know what an amazing job that you are doing teaching people today through your websites. Most probably you haven’t encountered all of us.

  9. Cara Membuat Website Gratis

    Great info about antarctic campaign !There testament be an overview of the drive plus a debut of repercussions by task divisions, followed by a Cabaret beside scientists, where you can obtain to apprehend outdo the entrants in the Antarctic Crusade.

Leave a Reply

Your email address will not be published. Required fields are marked *